目前在已报道的各种检测PCR反应产物的方法中,有“杂交”[4]和“不杂交”[5]两种途径。杂交的反应在检测中需要利用一定技术(如NaOH处理)先使被固相所捕获的PCR产物成为单链,再应用标记的探针去和PCR产物进行杂交,待反应完成后加酶、显色等;而应用双标记(即两条引物分别标记不同的修饰物)技术则不需要这一系列的解链、杂交等反应,操作上相对较简单。理论上说,通过杂交这一途径可以消除PCR反应中非特异扩增杂带的影响,使检测结果更加准确、可靠,但该方法操作繁琐,而且由于引入了腐蚀性较强的特殊试剂(如NaOH、杂交液等)因而不利于将来的自动化应用。我们认为,如果一个病原体的PCR检测技术已经相当成熟,条件得到充分优化,在反应中不会出现非特异性扩增的影响(如乙型肝炎病*DNA、HCV-RNA等)时,就没有必要在产物检测中一定加入杂交这一步骤。这样对实验结果也没有影响。本实验中我们也先后试过用标记探针和PCR产物杂交和不杂交的方法,发现两者结果没有不同,电泳时也可看出PCR反应后确实无非特异性扩增带。因此,我们认为这种不杂交的方法对于HCV-RNA的RT-nPCR产物检测是合适的;当然,对于其他扩增反应中易出现非特异性扩增的产物,还是应用杂交的方法检测更可靠。
在金城江区,何辛幸先后前往市国税局慰问全国五好文明家庭、全国百名优秀母亲罗金艳,前往广西金河矿业公司慰问困难职工于应学和刘金义。
"火箭蛋"破5元关创新高